0 引言

五爪金龙是广西壮瑶聚集地区常见的多年生缠绕草本植物，也是广西少数民族地区常用民族药, 其常攀缘于乡村及城市周边低矮建筑屋顶、外墙或其他植物生长，分布很广泛。《南宁市药物志》记载其名为五叶藤，五爪龙。原植物来源为旋花科植物五爪金龙(Ipomoea cairica (L.) Sw.)的干燥全草，因其叶片掌状五深裂或全裂形似手掌得名五爪金龙。中医用五爪金龙治肺热咳嗽，小便不利，淋病，尿血，痈疽肿毒^[1-2]。瑶医认为本品淡，平，具有清热毒、除湿毒的作用，可治疗痈肿、疔、骨折、跌打损伤、痹病。然而近年来没有五爪金龙药材的药学文献报道，也没有其药材标准，限制了五爪金龙的开发利用及临床使用。此外，该药材存在异药同名的现象，多个药材别名亦叫五爪金龙，容易混淆，导致混用错用。因此，本文作者在野外采集广西10个产地的野生五爪金龙药材，经鉴定为正品后，对药材成分进行分析研究，拟找出能够作为五爪金龙药材定性鉴别及定量分析的特征成分。

笔者在研究中发现药材中木质素类成分牛蒡苷元含量较高。牛蒡苷元是五爪金龙药材中含有的药效活性成分^[3]。现代药理研究报道其具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎等多种药理作用^[4-6]。这些药理作用与药材功效相关，能体现出牛蒡苷元在该药材使用及治疗过程中发挥的重要意义。查阅并参考相关文献^[7-8]的基础上，本研究开展了对五爪金龙药材中牛蒡苷元的定性和定量检测方法的探索，拟寻找一个操作简捷方便、准确、可重现性好的检测方法，为五爪金龙药材质量的检测提供依据并为后期研究打下基础。

1 材料与方法 1.1 材料

安捷伦1260 infinity高效液相色谱仪(美国安捷伦)，YOKO-ZS紫外分析摄影仪(武汉药新技术开发有限公司)，METTLER TOLEDO XS 205电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)，KQ-300DB型数控超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，HHitech和泰水纯化系统(上海和泰仪器有限公司)，LHP-250型智能恒温恒湿培养箱(上海鸿都电子科技有限公司)。牛蒡苷元为成都瑞芬思生物科技有限公司提供(纯度大于98%)(批号：N-013-160406)。硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)，乙腈(美国默克公司)为色谱纯，高纯水实验室自制。其余试剂均为分析纯。

10批次药材经由广西中医药大学韦松基教授、广西中医药研究院赖茂祥研究员和黄云峰副研究员鉴定为旋花科植物五爪金龙(Ipomoea cairica (L.) Sw.)的干燥全草。

1.2 方法 1.2.1 薄层色谱法(TLC)定性鉴别 1.2.1.1 样品溶液制备

取五爪金龙样品粉末(过四号筛)2 g，加甲醇(100%甲醇)20 mL，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30 min，滤过，滤液用40 mL石油醚(60~90℃)萃取2次，弃去石油醚液，甲醇液浓缩至2 mL作为供试品溶液。再取牛蒡苷元对照品，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg牛蒡苷元的对照品溶液。

1.2.1.2 定性鉴别

薄层色谱法按照2015年版《中国药典》四部通则0502^[9]方法进行实验：吸取1.2.1.1节2种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷:乙酸乙酯:甲酸(11:9:0.4，V:V:V)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

1.2.2 高效液相色谱法(HPLC)定量测定牛蒡苷元含量

色谱条件：色谱柱为菲罗门Gemini 5u C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇:水(45:55, V:V)为流动相，检测波长为280 nm，流速1 mL/min，柱温为室温，理论板数按牛蒡苷元峰计算应不低于2 000。

供试品溶液的制备：取五爪金龙样品粉末(过四号筛)约1 g，精密称定，精密加入甲醇40 mL，称定质量，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30 min，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，0.45 μm微孔滤膜滤过滤过，取续滤液，即得五爪金龙样品供试液。

对照品溶液的制备：取牛蒡苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含牛蒡苷元0.4 mg的溶液，即得牛蒡苷元对照品供试液。

将供试品溶液及对照品溶液分别取10 μL注入高效液相色谱仪进行检测。

2 结果与分析 2.1 五爪金龙药材的定性鉴别(TLC法)

10批次五爪金龙药材的TLC实验结果详见图 1。

从薄层色谱图(图 1)可以看出，五爪金龙药材供试品溶液中牛蒡苷元与牛蒡苷元对照品溶液的颜色、位置都对应，且斑点清晰，与前后斑点分离，Rf值适中。薄层板上还有另一紫红色共有斑点。可见薄层方法能有效鉴别五爪金龙中的牛蒡苷元。

2.2 五爪金龙药材的牛蒡苷元含量定量测定(HPLC法) 2.2.1 高效液相色谱图

牛蒡苷元对照品与五爪金龙药材(样品编号WZJL-5)HPLC色谱图结果见图 2与图 3。

2.2.2 线性关系考察

取牛蒡苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制备成1.053 5 mg/mL的溶液，备用。分别精密吸取牛蒡苷元对照品溶液0.4 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL置10 mL量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀，即得线性供试液。将牛蒡苷元对照品溶液按照标准正文色谱条件分别进样10 μL，测定，以对照品的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果：回归方程为y=83.229x，R²=0.999 7，表明当牛蒡苷元对照品进样量在0.42~5.26 μg时，进样量与峰面积呈良好的线性关系，详见图 4。

2.2.3 定量检测方法性能考察 2.2.3.1 重复性

取同一份供试品溶液(WZJL-5)，按照1.2.2项下供试液制备方法及色谱条件连续测定5次。结果：5次测定的牛蒡苷元峰面积平均值为2 786.1，RSD=0.91%(n=5)，表明含量测定方法的重复性良好。

2.2.3.2 重现性

取同一批样品(WZJL-5)粉末，按照1.2.2项下供试液制备方法平行制备6份供试品溶液，测定牛蒡苷元含量。结果：6份样品测得牛蒡苷元含量的平均值为0.36%，RSD=1.35%(n=6)，表明含量测定方法的重现性良好。

2.2.3.3 稳定性

取同一份供试品溶液(WZJL-5)，按照1.2.2项下供试液制备方法及色谱条件，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、24 h分别进样，测定峰面积值。结果：牛蒡苷元峰面积平均值为2 782.1，RSD=0.43%(n=6)，表明供试品溶液中牛蒡苷元含量在24 h内是稳定的。

2.2.3.4 加样回收率测定

取牛蒡苷元适量，加甲醇制成浓度为0.04 mg/mL的溶液。采用加样回收法，分别称取同一批样品(WZJL-5)粉末约0.5 g共6份，精密称定，分别加入上述牛蒡苷元对照品溶液40 mL，按照1.2.2项下供试液制备方法制备供试品溶液，并测定其平均回收率及RSD。结果：样品中牛蒡苷元平均回收率为100.43%，RSD=2.09%(n=6)，详见表 1。

2.2.3.5 10批药材中牛蒡苷元含量测定结果

按照1.2.2项下供试液制备方法制备10批五爪金龙药材供试品溶液，并测定牛蒡苷元含量，结果见表 2。

2.2.4 HPLC结果分析

从液相色谱图结果(图 2和图 3)可以看出，在此色谱条件下，牛蒡苷元色谱峰的峰形尖锐，峰具对称性，分离度均较理想，且出峰时间合理，避免了其他峰的干扰。线性实验表明，采集的10批药材含量均在线性范围内，可以直观地检测出药材中牛蒡苷元的含量。方法性能考察实验显示，本文方法科学、准确，可重复性好。另外，10批药材的牛蒡苷元含量测定结果表明，广西不同产地药材中的牛蒡苷元含量差异较大。但从含量上看，10批五爪金龙均富含牛蒡苷元，故本文研究选取的木质素类成分牛蒡苷元适合作为五爪金龙药材质量控制的指标成分。这对五爪金龙药材的质量标准控制研究具有重要意义，并提供了有助于药材后续研究的质量控制基础。

3 结论

五爪金龙是广西少数民族地区常用的一个民族药，且野生分布广泛，容易获取。本研究探索瑶药五爪金龙中牛蒡苷元的定性、定量分析检测方法。本文对五爪金龙药材中牛蒡苷元的定性鉴别及定量检测方法操作简便，准确度高，重现性好，为建立五爪金龙药材质量标准提供了指标性成分的来源。该方法可以作为瑶药五爪金龙鉴别、检测及质量控制的理论依据和手段。另外，牛蒡苷元是药理活性成分，五爪金龙药材中牛蒡苷元的含量较高，可以成为牛蒡苷元成分提取物的来源药材，对拓展药源和提升五爪金龙药材市场利用率有十分重要的意义。