0 引言

木榄(Bruguiera gymnorrhiza (Linn.) Savigny)是红树科木榄属植物，为我国传统药用红树植物，又名包罗剪定、鸡爪浪、剪定、枷定、大头榄、鸡爪榄、五脚里等，多散生于秋茄树的灌丛中。我国主要分布在广东、广西、福建、台湾及其沿海岛屿，国外主要分布在非洲东南部、印度、斯里兰卡等地^[1]。木榄是一种很有价值的海洋药用植物，具有清热解毒、止泻、收敛止血等多种药理功效，民间用于治疗发烧、腹泻、止血、消除咽喉肿痛及对抗疟原虫等，被《海洋药物》《现代本草纲目》等中草药专著收摘^[2-3]。木榄叶子中所含的化学成分十分丰富，含多种脂肪酸、氨基酸、多糖、黄酮以及萜类等化合物^[4-6]。这些已知的化学成分或与木榄的药理功效有所关联。早期研究发现，木榄叶药材中含有多种黄酮类化学成分，但目前国内外对木榄的分析研究大多在性状、显微、化学成分和基因等方面^[7-10]，国家标准和地方标准也均未见收载木榄药材。鉴于此，笔者采用薄层色谱法对木榄进行定性鉴别，并测定其水分、总灰分、浸出物及总黄酮含量，为有效控制该药材质量提供依据。

1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 仪器

HC-1000Y高速多功能粉碎机(永康市天祺盛世工贸有限公司)，SQP电子分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，HYC-390医用冷藏箱(青岛海尔生物医疗股份有限公司)，DHG9240A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)，UV-1780紫外可见分光光度计(岛津企业管理有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，KQ5200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，ZF-7型暗箱式三用紫外分析(上海嘉鹏科技有限公司)，Direct-Q5UV实验室超纯水器(广西南宁市博美生物科技有限公司)。

1.1.2 药品

芦丁对照品(批号311F024，购于北京索莱宝科技有限公司，供含量测定用)，硅胶板GF₂₅₄(海洋牌，青岛海洋化工有限公司，批号20180308；银龙牌，烟台市化工研究所，批号20180118)；水为纯水，亚硝酸钠、氢氧化钠、乙酸乙酯、甲酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯。

10批木榄叶药材样品经广西中医药大学韦松基教授鉴定为木榄Bruguiera gymnorrhiza (Linn.) Savigny成熟叶。

1.2 方法 1.2.1 薄层色谱法鉴别木榄药材

供试品溶液制备：将已晒干的木榄叶药材粉碎，过5号筛，分袋密封，保存至干燥器中，取木榄药材样品1 g，加75%甲醇溶液溶解，摇匀，称重后超声40 min，补足减失的质量，过滤至10 mL容量瓶中，定容即得。

对照品溶液制备：取芦丁标准品2 mg，加适量75%甲醇溶液，移至10 mL容量瓶中，定容即得。

定性鉴别：按照薄层色谱法^[11]进行试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液适量，点于同一薄层板，在乙酸乙酯:甲酸:水(7:1:1，V:V:V)中预饱和20 min后展开，取出，晾干，喷3%三氯化铝乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。

1.2.2 水分测定

按照2015版《中国药典》四部通则0832第二法^[12]进行木榄的水分测定。取供试品约2 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，疏松供试品不超过10 mm，精密称定，打开瓶盖在105℃下干燥5 h后，把瓶盖盖好，转移到干燥器里面，放置冷却30 min，精密称定后，重新在105℃下干燥1 h后，放置在干燥器中冷却，进行称重，要求连续两次称重的质量差不超过5 mg即可。

1.2.3 总灰分测定

按照2015版《中国药典》四部通则2302法^[13]测定。测定用的供试品粉碎，过2号筛，混合均匀后，取供试品3 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定质量(准确至0.01 g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500~600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣质量，计算供试品中总灰分的含量(%)。

1.2.4 浸出物测定

按照2015版《中国药典》四部通则2201法^[14]测定。分别对木榄叶进行冷浸法、热浸法的考察。冷浸法：取样品约4 g，置250 mL锥形瓶中，精密加入水100 mL，塞紧冷浸，前6 h内时时振摇，再静置18 h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取滤液20 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，移置干燥器中，冷却30 min, 迅速精密称定质量。热浸法：取供试品约2 g，置250 mL锥形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，称定质量，静置1 h，连接回流冷凝管，加热至沸腾并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定质量，用水补足减失质量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器冷却30 min，迅速精密称定质量。醇溶物检查用50%的乙醇来代替水作为溶剂。

1.2.5 总黄酮含量测定 1.2.5.1 供试品溶液制备

称定适量的木榄药材粉末，转移到50 mL离心管中，精密加入75%乙醇30 mL，使药材粉末得到充分浸泡，于室温下浸泡2 h，超声30 min后室温4 000 r/min离心20 min，分离上清液即得样品溶液。

1.2.5.2 对照品溶液制备

精密称取芦丁标准品0.010 0 g，用75%乙醇溶解摇匀，定容至10 mL容量瓶中，再取1 mL此标准液于10 mL容量瓶，稀释并定容为0.1 mg/mL的芦丁标准品溶液，冷藏备用。

1.2.5.3 测定波长选择

精密量取供试品溶液和0.1 mg/mL的芦丁标准品溶液各300 μL，分别置于10 mL容量瓶中，加入5% NaNO₂溶液300 μL，摇匀，静置6 min后，加入10% Al(NO₃)₃溶液300 μL，摇匀，静置6 min后，加入4% NaOH溶液2 mL，用75%乙醇稀释至刻度，摇匀，转移至离心管中，室温下12 000 r/min离心3 min后，分离上清液，于350~700 nm下进行全波长扫描。取75%乙醇溶液作为空白对照，得到样品溶液和芦丁标准品溶液的全波长扫描图。

1.2.5.4 线性关系考察

分别精密量取0.1 mg/mL的芦丁标准品溶液3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL于10 mL容量瓶中，按照1.2.5.3节显色方法进行显色，用75%乙醇稀释至刻度，以75%乙醇作为空白对照，于508 nm下测定吸光度。以芦丁标准品溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.5.5 精密度试验

取同一份供试品溶液，按照1.2.5.3节显色方法进行显色，于508 nm下测定吸光度，连续6次，考察该方法的精密性。结果的RSD小于2.8%，表明该方法精密度良好。

1.2.5.6 重现性试验

取6份相同批次的木榄药材，按照1.2.3.3节显色方法进行显色，于508 nm下分别测定吸光度，用以检测该方法的重现性。结果的RSD小于2.8%，时表明该方法重现性良好。

1.2.5.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液，按照1.2.5.3节显色方法进行显色，分别测定显色0 min、5 mim、10 min、20 min、40 min、60 min后于508 nm处的吸光度，考察该方法的稳定性。结果的RSD小于2.8%，表明该方法稳定性良好。

1.2.5.8 加样回收试验

精密称取芦丁标准品0.085 3 g，用75%乙醇溶解摇匀，稀释并定容至10 mL容量瓶中，即得8.53 mg/mL的芦丁标准品溶液，冷藏备用。

精密称取6份相同批次的木榄药材粉末0.75 g，按照1.2.5.1节制备样品溶液。精密量取上述样品溶液各300 μL于10 mL容量瓶中，分别精密加入上述芦丁标准品溶液2 mL，按照1.2.5.3节显色方法进行显色，于508 nm下分别测定吸光度，计算加样回收率，用以检测该方法的准确度。结果的RSD小于5%，表明该方法准确度良好。

1.2.5.9 样品测定

按1.2.5.3节方法，测定3批样品中总黄酮的含量。

2 结果与分析 2.1 薄层色谱鉴别

如图 1所示，在与对照品色谱相对应的位置上，10个批次木榄叶药材样品均有与芦丁相似的荧光斑点，但不同产地木榄药材的主荧光斑点大小稍有差别。

2.2 水分、总灰分及浸出物测定结果 2.2.1 水分测定结果

结果如表 1所示，10批木榄药材的水分含量为7.95%~10.53%，水分含量上限为水分含量的最大值(10.53%)上浮10%，考虑到不同产地药材之间的差异，并且为了避免贮存过程中因水分含量过高而产生霉变，暂定木榄的水分含量不应超过12%。

2.2.2 总灰分测定结果

结果如表 2所示，10批木榄药材的总灰分含量为8.53%~9.52%，上限即总灰分含量的最大值(9.52%)上浮10%，为保证药品的纯度，结合实际情况暂定木榄的总灰分含量不得超过11%。

2.2.3 醇溶性浸出物测定结果

结果见如表 3所示，10批木榄的热浸法醇溶性浸出物含量在13.05%~16.14%，将最低测定值下浮10%作为含量下限值，规定醇溶性浸出物不得少于12%。

2.2.4 总黄酮测定结果 2.2.4.1 测定波长的确定

如图 2所示，样品溶液和芦丁标准品溶液的波峰均在505 nm附近，可选择作为测定波长。

2.2.4.2 线性关系

以芦丁标准品溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到线性方程为y=10.709x-0.0744，相关系数r=0.999 80，样品溶液浓度在0.03~0.07 mg/mL呈现良好的线性关系。

2.2.4.3 精密度试验

6次测定总黄酮的吸光度，测定结果的RSD为0.09%(n=6)，表明该方法精密度良好。

2.2.4.4 重现性试验

测得6份供试品溶液的总黄酮平均含量为35.54 mg/g，测定结果的RSD为2.2%(n=6)，说明该方法重现性好。

2.2.4.5 稳定性试验

6个不同时间点测定的总黄酮的吸光度平均值为0.406，测定结果的RSD为1.9%(n=6)，证明该方法比较稳定。

2.2.4.6 加样回收试验

6份供试品的回收率在101.6%~104.4%，平均回收率约为103.2%，测定结果的RSD为1.1%，表明该方法准确度良好。

2.2.4.7 样品测定

如表 5所示，样品中总黄酮含量在33.36~37.57 mg/g。

3 结论

本研究建立的木榄质量标准中的定性和定量方法，符合中药质量标准制订技术要求，操作简捷，可用于木榄药材质量评价和控制。