引用本文：
  • 游金,李游,施洁,卢洁,卢春花.LC3真核表达载体构建及其在293T细胞中自噬诱导研究[J].广西科学,2018,25(3):313-317,324.    [点击复制]
  • YOU Jin,LI You,SHI Jie,LU Jie,LU Chunhua.Study on Construction of LC3 Eukaryotic Expression Vector and Its Autophagy Induction in 293T Cells[J].Guangxi Sciences,2018,25(3):313-317,324.   [点击复制]
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LC3真核表达载体构建及其在293T细胞中自噬诱导研究
游金, 李游, 施洁, 卢洁, 卢春花
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(广西大学生命科学与技术学院, 广西南宁 530005)
摘要:
[目的]构建pEGFP-N1-LC3真核表达载体,并将其转染进人胚肾细胞293T,通过Earle's盐平衡液(Balanced salt solution,EBSS)饥饿诱导观察细胞自噬现象。[方法]RT-PCR扩增LC3基因,并将其插入pEGFP-N1真核表达载体构建重组质粒。将重组质粒转染至人胚肾细胞293T,显微镜观察、Western blot检测GFP-LC3融合蛋白表达情况。对转染细胞进行Earle's盐平衡液饥饿诱导,通过Western blot验证自噬指标,激光共聚焦显微镜观察自噬泡形成。[结果]成功构建pEGFP-N1-LC3真核表达载体,并在293T细胞中成功表达目的蛋白,在进行Earle's盐平衡液饥饿诱导后观察到自噬泡的形成,Western blot检测到LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化。[结论]本实验为研究自噬在癌细胞病理进程中的机制提供了实验素材。
关键词:  LC3  细胞自噬  绿色荧光蛋白  人胚肾293T细胞
DOI：10.13656/j.cnki.gxkx.20180528.005