Streptomyces rubrogriseus)硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase，TrxR)基因trxB，通过构建重组质粒并将其转化到大肠杆菌[Escherichia coli BL21(DE3)]中进行表达，得到的TrxR经镍离子亲和层析纯化后测定酶学性质。结果表明：经PCR扩增得到大小为969 bp的trxB，并成功构建重组质粒pET22b-trxB。在最优诱导表达条件[异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L，光密度(OD₆₀₀)为0.8，诱导温度为30 ℃，诱导时间为4 h]下，纯化后的TrxR大小为38.5 kDa。以羽毛粉为底物进行酶促反应时，TrxR的最适pH值为8.0，最适温度为60 ℃；K⁺、Mg²⁺对TrxR酶活力有明显的激活作用,而Fe²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺对其有明显的抑制作用；异丙醇、苯甲基磺酰氟(PMSF)、二甲基亚砜(DMSO)均对TrxR酶活力有抑制作用,而二硫苏糖醇(DTT)对TrxR酶活力有促进作用；TrxR酶促反应的米氏常数(K_m)为64.04 mg/mL，最大反应速率(V_max)为3.70 U/min。TrxR具有较高的酶活力和回收率，在降解羽毛角蛋白方面有一定的应用价值。]]> 2025/9/10 8:52:04 4true Chitinilyticum aquatile CSC-1中克隆几丁质酶基因CaChi18B及其截短突变体CaChi18B_ΔChBD₁并诱导表达、纯化，同时对获取的重组几丁质酶CaChi18B_ΔChBD₁进行酶学性质研究。实验结果表明，截短几丁质结合域(ChBD₁)后，目的蛋白的可溶性表达水平提高。以胶体几丁质为底物时，CaChi18B_ΔChBD₁比活力为3.05 U·mg^-1,最适温度为50 ℃，最适pH值为7；米氏常数(K_m)为0.662 6 mg·mL^-1，最大反应速率(V_max)为1.104 μmol·L^-1·min^-1·mg^-1,转换频率(k_cat)为11.04 s^-1。利用高效液相色谱(HPLC)对水解产物进行分析，结果表明重组几丁质酶CaChi18B_ΔChBD₁是具有几丁二糖外切酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的双功能酶。本研究构建的重组几丁质酶具有较好的酶活力和环境耐受性，在降解几丁质及虾蟹壳生物质方面有一定的应用前景。]]> 2025/9/10 8:52:04 3true Chitinilyticum aquatile CSC-1中，鉴定出一种新颖的几丁质脱乙酰酶CaCDA1。采用PCR技术扩增获得了CaCDA1基因及其截短突变体CaCDA1_CD的基因序列，随后构建重组质粒，并转化至Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL宿主菌中进行诱导表达。利用对硝基乙酰苯胺法测定酶活性，结果显示该酶的最适温度为45 ℃，最适pH值为5.0，在此条件下CaCDA1粗酶液活性为(7.70±0.47) U/mL，而CaCDA1_CD粗酶液活性为(6.12±0.57) U/mL。本研究成功克隆、表达并初步表征了CaCDA1及其截短突变体，为深入解析CaCDA1的功能特性及其潜在应用价值奠定了理论基础。]]> 2025/9/10 8:52:04 2true Mauremys mutica)龟甲为研究对象，通过熬煮提取、石油醚脱脂、透析除杂获得龟甲蛋白质；采用复合蛋白酶酶解结合超滤纯化，制备得到多肽组分；通过体外小鼠脾脏细胞、巨噬细胞试验对多肽组分进行免疫功能验证；利用液质联用技术对龟甲活性肽进行序列鉴定，筛选具有免疫活性的肽段。结果表明，龟甲活性肽可显著提高小鼠脾脏细胞存活率；在RAW264.7巨噬细胞中，龟甲活性肽能显著提高巨噬细胞的存活率、中性红吞噬能力及一氧化氮(NO)分泌量，并有效抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症过度反应。质谱鉴定共得到179条肽段，通过神经网络预测分析，筛选出9条具有免疫活性的肽段。本研究揭示了龟甲活性肽通过双向调节免疫细胞功能发挥治疗潜力，不仅为龟甲药用物质基础研究提供了新依据，而且为开发新型免疫调节剂奠定了技术基础。]]> 2025/9/10 8:52:04 1true